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    亮發(fā)光桿菌的分離、培養(yǎng)

    點擊次數(shù):922  更新時間:2017-09-14

    亮發(fā)光桿菌實驗方法   
    1、銅柱系統(tǒng)除氧
    2、預(yù)還原培養(yǎng)基及稀釋液的制備
          制作預(yù)還原培養(yǎng)基及稀釋液時,先將配置好的培養(yǎng)基和稀釋液煮沸驅(qū)氧,而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中,一般瓊脂培養(yǎng)基裝4.5~5.0mL,稀釋液裝9mL,并插入通N2氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚的看到培養(yǎng)基內(nèi)加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍(lán)到紅zui后變成無色,說明試管內(nèi)已成為無氧狀態(tài),然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋,滅菌備用。
    3、分離
    (1)編號
          取五支無菌水試管,分別用記號筆標(biāo)明10-1、10-2……10-5。
    (2)稀釋
          在無菌條件下,用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品,加入裝有預(yù)還原生理鹽水的厭氧試管中,用震蕩器將其混合均勻,制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中,制成10-2稀釋液。依此進(jìn)行10倍系列稀釋,至10-7,制成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進(jìn)行滾管計數(shù)。
    (3)滾管分離
    1)滾管
          將無氧無菌的瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中溶化,置46-50℃恒溫的水浴中,待用,用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個稀釋度各0 .1mL,分別注入待用的試管中,然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動,帶菌的溶化瓊脂在試管內(nèi)壁會即刻形成凝固層。
    2)分離
          生成的亮發(fā)光桿菌落需挑取出來,鏡檢其形態(tài)及純度。如尚未獲得純培養(yǎng)物,需再次稀釋滾管,并再次挑取菌落,直至獲得純培養(yǎng)物為止。待挑取的單菌落預(yù)先在放大鏡下觀察確定,做好標(biāo)記。然后將培養(yǎng)基試管固定于適當(dāng)?shù)闹Ъ苌?,打開試管膠塞,同時迅速將氣流適當(dāng)、火焰滅過菌的氮?dú)忾L針頭插入管內(nèi)。同時,另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準(zhǔn)備好的彎頭毛細(xì)管小心插入固體培養(yǎng)基內(nèi),找準(zhǔn)待挑菌落,輕輕吸取,轉(zhuǎn)移至液體試管內(nèi),加塞。37℃培養(yǎng)。培養(yǎng)24h或待培養(yǎng)液混濁后檢查已分離培養(yǎng)物的純度。
    鄰苯二甲suan丁芐酯-D4 標(biāo)準(zhǔn)品    純品型,有證書,10mg    CDEO-NF014-25mg    呋喃唑酮代謝物的衍生物2-NP-...    25mg    CDCT-C16168010
    連*苯/1,2,3-*基苯    1000mg/L;1ml    CDGG-021128-02    1,2-二溴四氟乙烷(Hlon ...    2000mg/L;1ml    CDGG-020869-05
    喹氧靈    1000mg/L;1ml    CDGG-031657-02    戊菌唑    1000mg/L;1ml    CDGG-031836-03
    奎寧 標(biāo)準(zhǔn)品    純品型,有證書,0.1g    CDDM-M884100-25mg    楊梅素    25mg    CDCT-C16706900
    可溶性淀粉    5g    CDGG-010408-08    蔗糖 標(biāo)準(zhǔn)品    25ml    CDCP-CARB-37-5g
    糠醛    2000mg/L;2x0.6ml    CDGG-031049-01    呋喃    1000mg/L;1ml    CDGG-031264-02
    亮發(fā)光桿菌

     

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