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    *0感受態(tài)細(xì)胞操作步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):2990  更新時(shí)間:2015-12-11

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        本產(chǎn)品是大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于  DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。*0是一種常用于質(zhì)??寺〉木?,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10 8  ,適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

    本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途 

    注意事項(xiàng)

    1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存,不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。

    3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對(duì)照試驗(yàn)使用。

     操作步驟

    1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

    以下實(shí)驗(yàn)以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

    2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

    3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

    4.每個(gè)離心管中加入450 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

    5.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi),將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

    注意:

    1)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少,可通過(guò)離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

    2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

    3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞

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