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    首頁   >    新聞資訊   >   亮發(fā)光桿菌的莢膜染色方法

    亮發(fā)光桿菌的莢膜染色方法

    點擊次數(shù):817次  更新時間:2018-03-05

    一、亮發(fā)光桿菌實驗原理
    由于莢膜與染料間的親和力弱,不易著色,通常采用負(fù)染色法染莢膜,即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色,從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上,故染色時一般不加熱固定,以免莢膜皺縮變形。
    二、實驗方法
        推薦以下四種染色法,其中以濕墨水方法較簡便,并且適用于各種有莢膜的細(xì)菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。
    1、負(fù)染色法:
    (1)制片:取潔凈的載玻片一塊,加蒸餾水一滴,取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。
    (2)干燥:將涂片放在空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。
    (3)染色:在涂面上加復(fù)紅染色液染色2—3min。
    (4)水洗:用水洗去復(fù)紅染液。
    (5)干燥:將染色片放空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。
    (6)涂黑素:在染色涂面左邊加一小滴黑素,用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素,使黑素沿玻片邊緣散開,然后向右一拖,使黑素在染色涂面上成為一薄層,并迅速風(fēng)干。
    (7)鏡檢:先低倍鏡,再高倍鏡觀察。
    結(jié)果:背影灰色,菌體紅色,莢膜無色透明。
     2、濕墨水法
    (1)制菌液:加1滴墨水于潔凈的載玻片上,挑少量菌體與其充分混合均勻。
    (2)加蓋玻片:放一清潔蓋玻片于混合液上,然后在蓋玻片上放一張濾紙,向下輕壓,吸去多余的菌液。
    (3)鏡檢:先用低倍鏡、再用高倍鏡觀察。
    結(jié)果:背景灰色,菌體較暗,在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即為莢膜。
     3、干墨水法
    (1)制菌液:加1滴6%葡萄糖液于潔凈載玻片一端,挑少量膠質(zhì)芽胞桿菌與其充分混合,再加1環(huán)墨水,充分混勻。
    (2)制片:左手執(zhí)玻片,右手另拿一邊緣光滑的載玻片,將載玻片的一邊與菌液接觸,使菌液沿玻片接觸處散開,然后以30度角,迅速而均勻地將菌液拉向玻片的一端,使菌液鋪成一薄膜。
     (3)干燥:空氣中自然干燥。
     (4)固定:用甲醇浸沒涂片,固定1 min,立即傾去甲醇。
     (5)干燥:在酒精燈上方,用文火干燥。
     (6)染色:用甲基紫染1—2min。
     (7)水洗:用自來水輕洗,自然干燥。
     (8)鏡檢:先用低倍鏡再高倍鏡觀察。
     結(jié)果:背景灰色,菌體紫色,莢膜呈一清晰透明圈。
     4、Tyler法
    (1)涂片:按常規(guī)法涂片,可多挑些菌體與水充分混合,并將粘稠的菌液盡量涂開,但涂布的面積不宜過大。
    (2)干燥:在空氣中自然干燥。
    (3)染色:用Tyler染色液染5—7min。
    (4)脫色:用20%CuSO4水溶液洗去結(jié)晶紫,脫色要適度(沖洗2遍)。用吸水紙吸干,并立即加1—2滴香柏油于涂片處,以防止CuSO4結(jié)晶的形成。
    (5)鏡檢:先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。
     結(jié)果:背景藍(lán)紫色,菌體紫色,莢膜無色或淺紫色。
     三、亮發(fā)光桿菌注意事項
    1、加蓋玻片時不可有氣泡,否則會影響觀察。
    2、應(yīng)用干墨水法時,涂片要放在火焰較高處并用文火干燥,不可使玻片發(fā)熱。
    3、在采用Tyler法染色時,標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗,必須用20%CuSO4沖洗。
    9005-00-9     Polyoxyl 10 Stearyl Ether    聚氧乙烯硬脂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9004-67-5     Methylcellulose (AS)    甲基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9004-57-3    Ethylcellulose    乙基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9004-34-6        微晶纖維素標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9004-34-6    Powdered Cellulose (AS)    纖維素粉標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9003-27-4     Polyisobutylene    聚異丁烯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9003-20-7     Polyvinyl Acetate     聚乙酸乙烯酯標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9003-20-7     Polyvinyl Acetate Dispersion    聚乙烯乙酸酯分散體標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    90028-20-9        狹葉紫錐菊提取物標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    9001-73-4     Papain    木瓜酶標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    87-99-0     Xylitol     木糖醇標(biāo)準(zhǔn)品    1g
    亮發(fā)光桿菌

     

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