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    PCR檢測試劑盒“變性-退火-延伸”三個步驟的實(shí)現(xiàn)方法

    點(diǎn)擊次數(shù):5067次  更新時間:2021-03-23
       PCR檢測試劑盒可用于豬全血、血清、淋巴結(jié)、脾臟、肌肉等樣本中的非洲豬瘟病毒核酸檢測。在非洲豬瘟病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含有非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時監(jiān)測和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
     
      與此同時,該試劑盒技術(shù)無需常規(guī)核酸提取,僅需對樣品進(jìn)行簡單研磨、離心處理,即可開始后續(xù)核酸檢測。在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下,簡化了檢測步驟,將檢測時間縮短至不到1小時,成為適合于屠宰場、養(yǎng)殖場和流通環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測的技術(shù)。
     
      PCR檢測試劑盒“變性-退火-延伸”三個步驟的實(shí)現(xiàn)方法是:
      1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
     
      2、退火:退火也叫復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段,通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置,也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn);
     
      3、延伸:DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按照堿基互補(bǔ)配對原則和半保留復(fù)制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
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