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    維生素CELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):752次  更新時(shí)間:2021-04-14
       維生素CELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理:
      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被人維生素D捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的人維生素D呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
     
      維生素CELISA試劑盒的操作步驟:
      1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL
     
      2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
     
      3.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。
     
      4.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
     
      5.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
     
      6.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
     
      7.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
     
      8.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
     
      9.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
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