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    感覺態(tài)細胞的實驗操作步驟實際情況是怎樣的

    點擊次數(shù):808次  更新時間:2021-04-23
       感覺態(tài)細胞描述的是細胞所處的一種狀態(tài),在這種狀態(tài)下,細胞膜可以允許外源重組質(zhì)粒進入細胞內(nèi)部,且不會被限制性核酸內(nèi)切酶水解。
     
      感覺態(tài)細胞的實驗操作步驟:
      將電轉(zhuǎn)杯和微量離心管至于冰上。
     
      從冰箱取出電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞,放置在冰盒中直至*融化。
     
      當(dāng)細胞溶解*后,輕輕拍打混勻。取出細胞至置于冰上的預(yù)冷微量離心管中。
     
      如果使用克隆或連接試劑盒的連接Buffer,取熱滅活的連接產(chǎn)物到細胞中(沒有進行熱滅活的連接產(chǎn)物會抑制轉(zhuǎn)化反應(yīng)),用槍頭輕輕攪動;不要上下吹打混勻,這樣會產(chǎn)生氣泡并使細胞升溫。使用連接產(chǎn)物會引起電轉(zhuǎn)過程中的電弧。
     
      輕輕的將細胞/DNA混合物轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的電轉(zhuǎn)杯中,注意避免產(chǎn)生氣泡。用手指快速地將試管向下輕彈,使細胞沉積在井電轉(zhuǎn)杯的底部。根據(jù)以上推薦的電轉(zhuǎn)條件進行電轉(zhuǎn)。
     
      在脈沖10s內(nèi),加RecoveryMedium到電轉(zhuǎn)杯,用槍上下吹打重懸細胞,然后將含有細胞的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無菌培養(yǎng)管中。
     
      將培養(yǎng)管放在搖床上,37℃培養(yǎng)1h。
     
      從培養(yǎng)管中取轉(zhuǎn)化后的細胞涂布于含特定抗生素的LB(或其他培養(yǎng)基)瓊脂糖平板上。
     
      注意事項
     ?、?00nm波長處的OD值超過0.5要重新接種,重新培養(yǎng);
     
     ?、谠撨^程中所有用到的培養(yǎng)基均是無抗性的。
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