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    了解感覺態(tài)細胞的熱激與轉(zhuǎn)化過程

    點擊次數(shù):1422次  更新時間:2022-04-15
       感覺態(tài)細胞在基因工程實驗中,經(jīng)常要使用各種感受態(tài)細胞進行DNA的轉(zhuǎn)化操作。轉(zhuǎn)化指同源、異源的“裸露”的DNA分子被感受態(tài)細胞攝取并得到表達的基因水平轉(zhuǎn)移過程。感受態(tài)細胞的制備是分子生物學研究中的一個重要環(huán)節(jié),其制備質(zhì)量的好壞直接影響到后續(xù)實驗工作的進行。
     
      感覺態(tài)細胞的熱激與轉(zhuǎn)化:
      所謂轉(zhuǎn)化,即重組DNA分子體外構建完成后,導入感受態(tài)細胞,使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀的過程。轉(zhuǎn)化中常用的DNA類型是質(zhì)粒。
     
      冰上融化后,取50ul感受態(tài),加入目的DNA(一般是質(zhì)粒),輕輕混勻。然后將細胞和質(zhì)粒的混合物在冰上放置30分鐘。
     
      42℃水浴中熱激45秒(不同的感受態(tài)菌株熱激時間不一樣,即使同一感受態(tài)不同的有的熱激時間也不相同,所以要嚴格按照說明書上的熱激時間?。?/div>
     
      然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中2分鐘,該過程不要搖動離心管。然后向每個離心管中加入無菌的SOC或LB培養(yǎng)基,混勻后置于37℃,200rpm培養(yǎng)1小時,使細菌復蘇。
     
      根據(jù)實驗要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平板,37℃過夜培養(yǎng)。第二天,被質(zhì)粒轉(zhuǎn)化過的細菌將會形成菌落。接下來,計數(shù)菌落數(shù)目來計算轉(zhuǎn)化效率,它是成功轉(zhuǎn)化菌落的數(shù)目除以總DNA的量得到的數(shù)值。
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