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Rat gp130 Elisa試劑盒

型 號(hào)

產(chǎn)品時(shí)間2024-11-27

所屬分類Rat/大鼠Elisa試劑盒

報(bào)價(jià)1300

產(chǎn)品描述:Rat gp130 Elisa試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒,用于對(duì)液體樣本中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。

產(chǎn)品概述

Rat gp130 Elisa試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿及相關(guān)液體

性能:

1. 靈敏度:最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

原理:

采用雙抗體夾心法測(cè)定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,制成固相載體,實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD 值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算測(cè)試樣品中 ABP 濃度。

試劑盒組成:

QQ截圖20231025103947.png

結(jié)果判斷與分析:

1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。


6.jpg

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ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作?

一.先說(shuō)最嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤,看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說(shuō)明書,不按操作步驟加樣。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來(lái)做,導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色,無(wú)任何梯度。

二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,所含的試劑成分很可能是不一樣的,混用導(dǎo)致的結(jié)果是,浪費(fèi)珍貴的樣本,樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物,會(huì)導(dǎo)致顯色過(guò)弱或過(guò)強(qiáng),因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣。

三.不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋,結(jié)果稀釋成1:1000,導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)弱,結(jié)果不可用。

車.不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,孵育溫度不合適,實(shí)驗(yàn)帶來(lái)誤差。

五.洗滌不充分,每孔洗液加樣過(guò)少,或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)快,同時(shí)背景較高。

六.手洗板時(shí)所用槍頭沒(méi)有懸空加入洗液,導(dǎo)致洗液污染,整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。

七.剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋,導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮,下一次再做時(shí),顯色過(guò)弱或污染,CV值過(guò)高。

八.試劑盒保存條件不當(dāng)。試劑盒要求放4℃的,放在了-20℃?;蛘咭蠓?20℃的,放在了4℃。均會(huì)導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。

以上只是最常見的操作錯(cuò)誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意的細(xì)節(jié)很多,許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量。

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操作步驟:

1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。

2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組(6 個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。

注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul

的待測(cè)樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。

5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙拍干。

7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。

9. 讀板:在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。


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